DNA RECOMBINANTE, OBTENCIÓN Y APLICACIONES
El DNA recombinante se refiere a la combinación de segmentos o moléculas de DNA que no se encuentran juntas de manera natural en las hebras del mismo. En dicho proceso se utilizan técnicas que provienen de la bioquímica de los ácidos nucleicos unidas a metodologías genéricas desarrolladas originalmente para la investigación de bacterias y de virus , de esta manera se puede lograr que un organismo cualquiera produzca una proteína que sea totalmente extraña dentro de su organismo.
Para que el desarrollo de esta tecnología fuera posible, varias lineas de investigación aportaron conocimientos como :1- el conocimiento de las enzimas de restricción 2- replicacion de DNA 3-replicacion de virus 4-síntesis química de secuencias de los nucleotidos.
Esta técnica se emplea para la producción de proteínas en gran escala y lograr una superproducción, como en el caso de la insulina, que actualmente es producida por bacterias en grandes recipientes de cultivo, denominados biorreactores.A esto se dedica la biotecnologia. Los pasos principales para la producción de DNA recombinante son:
1. los fragmentos de DNA se producen utilizando las enzimas endonucleasas de restricción, que son las encargadas de reconocer y cortar las moleculas de este por secuencias nucleotidicas especificas.
2.los fragmentos que resultaron de la digestión con las enzimas de restriccion se unen a otras moléculas de DNA que sirven de vectores los cuales se pueden replicar autonomamente en una célula huésped y facilitan la manipulación de la molécula de DNA recién creada.
3. La molécula de DNA recombinante que esta formada por un vector lleva insertado un fragmento de DNA se transfiere a una célula huésped , dentro de esta la molecula de DNA se replica y produce docenas de copias idénticas llamadas "clones".
4. Luego de que todas las células replicadas de la célula huesped las descendientes de estas heredan el DNA recombinante, formando una población de células idénticas con toda la secuencia clonada.
5.los segmentos de DNA clonados se pueden recuperar de las celulas huesped y se purifican y analizan.
6. el DNA recombinado se puede transcribir y su mRNA se traduce y dicho producto génico se puede aislar y examinar.
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Estas enzimas permiten cortar el DNA sitios específicos. Algunas de ellas cortan dejando extremos cohesivos que se pueden pegar nada más que por complementariedad de bases. Esto quiere decir que un extremo que generó una enzima y otro que generó la misma enzima aunque provengan de moléculas de DNA diferentes se puede unir generando inicialmente un DNA recombinante. En 1972 se genera el primer DNA recombinante combinando el DNA de un plásmido, con un tramo de DNA de anfibio
TÉCNICAS DE TRANSFERENCIA O "BLOTTING"
se utilizan para separar y caracterizar ADN y ARN respectivamente. La técnica fue desarrollada por Edwin Southern para separar ADN y por analogía la separación de ARN se denominó Northern blot y la transferencia de proteínas se denominó 3 Western blot. En todas estas técnicas se realiza primero una electroforesis en gel con el objetivo de separar las moléculas por su tamaño y carga, posteriormente la transferencia a una membrana para finalmente identificar un fragmento específico de ADN, una molécula de ARN particular o una proteína de interés mediante la unión específica de otra molécula de ácido nucleico (sonda) para ADN o ARN o de un anticuerpo en el caso de las proteínas.
http://www.biorom.uma.es/contenido/av_bma/apuntes/T3/northern.png
APLICACIONES
Esta técnica es utilizada en la medicina ya que permitió como primera medida la producción de insulina recombinante , así como el uso de alimentos transgenicos,la hormona del crecimiento, interferones, la obtención de nuevas vacunas o la clonación de animales.
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CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
APLICACIONES
Esta técnica es utilizada en la medicina ya que permitió como primera medida la producción de insulina recombinante , así como el uso de alimentos transgenicos,la hormona del crecimiento, interferones, la obtención de nuevas vacunas o la clonación de animales.
CONCLUSIONES
- La tecnologia del DNA recombinante ha facilitado el estudio de la estructura y la funcion genica, estos avances estan revolucionando la medicina, la ganaderia, la agricultura entre otras industrias ya que al tener el control en el corte y empalme de secuencias de nucleotidos de interes.
- los vectores de expresion contienen las secuencias de DNA necesarias para la transcripcion, traduccion y regulacion de los genes clonados. permiten la produccion de grandes cantidades de proteinas con fines de investigacion y comerciales.
BIBLIOGRAFIA
- Bioquímica de Harper. Murray .Mayes. Granner. Rodwell. 15º Edición. 1.999.-
- CULTEK S.L.U. 2006. Tecnología del ADN recombinante. http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/DNA-recombinante/Tecnica%20DNA%20recombinante.pdf
- Tecnología del ADN recombinante y sus aplicaciones en la Medicina.http://www.fmed.uba.ar/depto/bioqhum/Seminario%2017%20Biologia%20Molecular.pdf
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